Notícias

-Ⅰ. O princípio da tecnologia do PCR

Este ano, o COVID-19 está furioso em todo o mundo, e todos devem ter ouvido falar de testes de ácido nucleico. Na detecção de ácido nucleico da epidemia, a tecnologia de fluorescência PCR desempenha um papel central, o que pode ajudar os inspetores a determinar com rapidez e precisão se eles estão infectados com o COVID-19.

O que exatamente é a tecnologia PCR?

PCR é um acrônimo para Polymerase Chain Reaction. Em suma, o PCR consiste em três etapas básicas de reação: desnaturação a alta temperatura-recozimento a baixa temperatura-extensão a temperatura média:

1. Desnaturação do ADN para tornar-se único-encalhado

Depois que o ADN do molde é aquecido a aproximadamente 95 °C por um determinado período de tempo, a dobro-fita do ADN do molde é dissociada em uma único-fita de modo que possa ligar à primeira demão e preparar-se para o círculo seguinte da reacção.

2. recozimento a baixa temperatura

Depois que o ADN do molde é desnaturado em únicas costas, a temperatura é abaixada a aproximadamente 55 °C, e as primeiras demão são emparelhadas com as seqüências complementares das únicas costas do ADN do molde.

3. Extensão temperatura média

Sob a ação da enzima Taq, os conjugados de DNA modelo e primer usam dNTP como matéria-prima de reação e a sequência alvo como modelo, de acordo com o princípio de emparelhamento de bases e replicação semi-reservada, e finalmente sintetizam uma nova cadeia de replicação semi-reservada complementar à cadeia de DNA modelo.

Ⅱ. Métodos de detecção de PCR fluorescente

Atualmente, a maioria dos reagentes de detecção de COVID-19 aprovados pela Administração Estatal de Medicamentos da China usa métodos PCR fluorescentes para detectar o COVID-19.

O método fluorescente do PCR refere adicionar grupos fluorescentes ao sistema da reacção do PCR. Com o progresso da amplificação do PCR, os produtos da reacção continuam a acumular, e a intensidade do sinal da fluorescência igualmente aumenta proporcionalmente. Fluorescência amplificação curva gráfico, detecção em tempo real de PCR fluorescência processo.

Ⅲ. Princípios de selecionar consumíveis fluorescentes PCR

1. material

O PCR é geralmente feito de material PP, porque os consumíveis PCR/qPCR geralmente estão em contato direto com reagentes ou amostras, enquanto o material de polipropileno (PP) é um material biologicamente inerte, a superfície não é fácil de aderir a biomoléculas e tem boa resistência química e temperatura. Tolerância (pode ser autoclavado em 121 °C e pode igualmente suportar mudanças de temperatura durante o ciclismo térmico). PCR consumíveis são todos os materiais PP.

2. PCR tubo/placa volume

Como escolher tubos de PCR/placas de diferentes volumes?

Selecção: seleccionar o produto adequado de acordo com os requisitos experimentais específicos. O volume de tubos do PCR pode na maior parte cumprir as exigências de reações do PCR. Os tubos PCR são ideais para experimentos PCR/qPCR de baixo a médio rendimento, com tubos e tiras individuais sendo os dois formatos mais usados.

Um único tubo fornece a flexibilidade para definir o número exato de reações a serem executadas. Alternativamente, um único tubo 0.5mL pode ser selecionado para volumes maiores da reacção.

Acoplamentos estão geralmente disponíveis em formato de 8 ou 12 tubos com separado ou com tampas. Compatível com pipetas de canal único e multicanal para experimentos de baixa e média produtividade. As tiras com tampas abrem e fecham os tubos independentemente para evitar a contaminação das amostras.

Espessura 3. Wall

A espessura da parede do tubo afeta diretamente a condutividade térmica e as espessuras extremamente finas otimizam a transferência de calor e reduzem o tempo do ciclo. O plástico de parede ultrafina é cerca de 50% mais fino do que a versão padrão, reduzindo ainda mais a barreira térmica, resultando em uma resposta mais rápida e robusta. Os consumíveis PCR são todas paredes tubulares ultrafinas.

4. Cor

Placas de PCR estão frequentemente disponíveis em uma variedade de formatos de cores diferentes para facilitar a diferenciação visual e identificação de amostras, especialmente em experimentos de alto rendimento. Para reações comuns do PCR, é possível usar tubos transparentes ou coloridos do PCR, e os tubos transparentes do PCR são mais úteis para a gestão da classificação da amostra.

Embora a cor do plástico não tenha efeito sobre a amplificação do DNA, os consumíveis PCR brancos de alta qualidade são recomendados para qPCR. Desde qPCR exige a detecção quantitativa do tempo real da intensidade do sinal da fluorescência, a transmissão sensível e exata do sinal da fluorescência é exigida. As experiências mostraram que, comparado com os produtos transparentes tradicionais do PCR, os produtos brancos do PCR podem refletir o sinal fluorescente na maior medida, reduzem a contaminação cruzada de sinais do espaço, e obtêm os resultados do PCR quantitativo da fluorescência do tempo real.

Diferentes marcas de instrumentos, devido ao design de posição diferente do detector de fluorescência, consulte os materiais recomendados pelo fabricante. Para o instrumento de PCR em tempo real Bio-Rad CFX ou Roche 480, o fabricante recomenda o uso de placas PCR brancas. Porque a placa do PCR é branca ou transparente, e tem várias especificações, é apropriada para instrumentos comuns do PCR no mercado.