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Dependendo da diferença na determinação de antígenos e anticorpos, existem muitos modos automáticos de medição ELISA, como método direto, método indireto, método duplo sanduíche de anticorpos (direto, indireto), método de inibição competitiva (direto, sanduíche, etc.), método de captura, etc. Em laboratórios clínicos, Os modos de medição ELISA comumente usados incluem método duplo sanduíche anticorpo, método indireto, método duplo sanduíche antígeno, método de inibição competitiva e método de captura.

Na determinação dos antígenos, o modo o mais de uso geral para a determinação de antígenos da macromolécula da proteína é o método dobro do sanduíche do anticorpo. Para moléculas pequenas com somente um único epítopo, o método competitivo da inibição é usado; a determinação do anticorpo usa geralmente o método indireto, o método dobro do sanduíche do antígeno, o método competitivo da inibição e o método da captação.

1. Método duplo do sanduíche do anticorpo da estação de trabalho ELISA

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the Estação ELISA uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" Kit teste médico.

Atualmente, em nosso laboratório clínico, a determinação de antígenos macromoleculares como HBsAg, alfa-fetoproteína (α-fetoproteína, αFP), antígeno prostático específico (PSA), marcadores da série CA, hCG e hormônios, etc. basicamente usam um método de uma etapa. Comparado com o método de duas etapas, o método de uma etapa é simples de operar, mas tem suas deficiências inerentes. Se não é segurado bem, os resultados do immunoassay do sanduíche do dobro-anticorpo serão resultados quantitativos falsos negativos ou baixos devido à existência do efeito do gancho.

2. Teste de lei competitiva da estação ELISA

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The Estação ELISA can only use the competitive inhibition method.

Neste modo do ensaio, uma combinação de moléculas e de enzimas pequenas precisa de ser obtida. A preparação de conjugados enzimáticos de moléculas pequenas não é tão simples quanto a de conjugados enzimáticos de anticorpos, e sua purificação também é bastante difícil. A diferença do peso molecular entre a enzima molécula-limite pequena e a enzima livre é pequena, e é difícil separar usando métodos gerais da peneira molecular. Portanto, algumas pessoas tentam estabelecer um método ELISA de competição de sanduíche de anticorpos duplos para a determinação de pequenas moléculas com base na síntese de moléculas pequenas di ou multimer. A sensibilidade e a especificidade da determinação foram melhoradas.

3. Método indireto de determinação de anticorpos na estação ELISA

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the Kit teste anticorpo-A. Antes que seja difícil obter antígenos de alta pureza e bem definidos, ou quando os antígenos são mais complicados, o método indireto é geralmente usado.

Hoje em dia, os itens de teste clínico comumente usados do anticorpo do vírus da hepatite C (anti-HCV) são todos métodos indiretos, e o método indireto é usado para detectar anticorpos. Estritamente falando, apenas a classe de anticorpos IgG é medida e as classes IgM e IgA não estão envolvidas. Isto é determinado pelo anticorpo secundário marcado com enzima. Presentemente, alguns jogos específicos da detecção do anticorpo IgⅢ adotam o método indireto.

Método do sanduíche do antígeno 4. Double da estação de trabalho ELISA

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the Estação ELISA has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. Direito da concorrência da estação ELISA

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the Estação ELISA can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).